فحص عينة من البول , التهاب المسالك البولية , Urinary tract infection

تمر عملية فحص البول بعدة خطوات وهي :
1- التعرف على الجراثيم المحتمل وجودها في البول مثل
Enterobacteriaceae وهي ساكن طبيعي في الجهاز الهضمي للإنسان مثل E.coli و Klebsiella pneumonia و Staph. Saprophyticas .
والبكتيريا الإنتهازية Opportunistic bacteria مثل Pseudomonas و Proteus و Serratia , Providans , Enterococci , Streptococcus ,
beta-hemolitic Strep B&D .
وتعتبر هذه الأنواع المذكورة سابقاً من الأنواع الأكثر شيوعاً والمسببة لإصابات الجهاز
البولي كما ويوجد أنواع غير شائعة لها دور في إصابة الجهاز البولي مثل Staph. Aureus و Lactobacilli ومن الفطريات مثل Candida والفيروسات مثل Adenovirus 2 .
2- جمع العينة :
يجب على المريض عدم أخذ المضادات الحيوية ثم يجمع البول في عبوة مناسبة ونظيفة
ومعقمة مع التنبيه على المريض استخدام طريقة البول الوسطي ( تقسيم البول إلى ثلاثة
أجزاء ) – لأن البول قد يتلوث بالكائنات الطبيعية الموجودة في الجسم – وذلك بطرح
كمية قليلة من البول ( الجزء الأول ) ثم وضع جزء من الكمية
المتبقية من البول ( الجزء الثاني ) في عبوة جمع العينة وطرح ما تبقى من البول (
الجزء الثالث ) خارج عبوة البول .

ولابد هنا من التنبيه على أن هناك طرق يتدخل فيها الطبيب لجمع عينة البول وذلك بحسب حالة المريض مثل أخذ العينة من المثانة بطريقة القسطرة أو سحب البول مباشرة منها كما ويتخذ الطبيب بعض الإجراءات للحصول على العينة عند الأطفال كوضع كيس البول .

خطوات فحص البول :

عند الحصول على عينة البول تؤخذ مباشرة إلى المختبر خلال ساعتين أو تحفظ في الثلاجة لحين التمكن من فحصها . وتمر عملية فحص عينة البول بعدة مراحل وهي :
أ- الفحص الظاهري Macroscopic examination :
ويتم بملاحظة العكورة واللون ويستخدم شريط خاص Dipstick يمكن باستخدامه الإستدلال على وجود كريات الدم البيضاء والحمراء والنترات وكمية السكر والبروتين كما يمكن التعرف على الكثافة النوعية للبول باستخدام جهاز خاص لذلك .

ب- الفحص المجهري ( الروتيني ) Microscopic examination :
يؤخذ 10 مل من البول ويوضع في أنبوب ويعمل له طرد مركزي عن 5000 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق ثم يؤخذ الراسب ويوضع كمية منه على شريحة نظيفة ويفحص تحت المجهر لملاحظة وجود كريات الدم الحمراء والبيضاء والأسطوانيات casts والبلورات crystals والبكتيريا والخلايا القيحية puss cells وبلورات الأملاح .
ويستفاد من هذا الفحص التأكد من خلو البول من الطفيليات مثل Trichomonas والبلهارسيا وغيرها مثل الفطريات . كما ويستفاد من الفحص الروتيني للبول التأكد من وجود دلائل على التهاب المسالك البولية ومنها زيادة البروتين وكذلك عدد البكتيريا يجب أن لا يزيد عن ألف خلية / ملل .

http://4.bp.blogspot.com/_rPEIVpjdH1M/S_qiQkZhbjI/AAAAAAAAAFA/eDLZA5wOOrg/s1600/%D8%A3%D9%85%D9%84%D8%A7%D8%AD.jpg

ملاحظة : يمكن في الوقت الحاضر استخدام تقنيات جديدة للتعرف على وجود البكتيريا وعددها وذلك لسرعة إجراء الفحص الميكروبي واختصاراً للوقت ومنها :
1- تقنية Bac-T-screen :
يتم من خلال استخدام هذه التقنية الكشف عن البكتيريا في البول وذلك باستخدام ورقة ترشيح خاصة معدة للقراءة بجهاز المطياف الضوئي spectrophotometer حيث تمرر عينة البول خلال ورقة الترشيح فتلتصق الجزيئات الموجودة على سطح الورقة وتمرر صبغة خاصة خلال ورقة الترشيح فتتلون الجزيئات الملتصقة وتقرأبعد ذلك بجهاز المطياف الضوئي وتقارن القراءة بورق معيارية للتأكد من النتائج .
ويلاحظ تغير اللون بالعين المجردة ومن حسنات هذه التقنية أنها تتم خلال دقيقتين فعند عدم تغير اللون خلال دقيقتين تعتبر النتيجة سلبية ويتم التوقف عند هذا الحد أما إذا حدث تغير للون فتكون النتيجة إيجابية فيتم بعد ذلك زراعة العينة للتعرف على المسبب وتشخيصه .
2- تقنية Automicrobic system :
تعتمد هذه الطريقة على قياس النمو البكتيري باستخدام جهاز المطياف الضوئي , حيث يتم وضع العينة في أوعية خاصة بهذه التقنية تحتوي على أوساط غذائية خاصة بنمو الكائنات المسببة لالتهاب المسالك البولية ثم يتم تحضين هذه الوعية لمدة 6 – 8 ساعات ثم تؤخذ هذه الأوعية وتوضع في الجهاز للتعرف على أعداد البكتيريا من خلال قياس العكورة ويضبط هذا الجهاز آلياً للتعرف على وجود البكتيريا وحساب عددها غير أن هذا الجهاز يعطي نتيجة سلبية في حال ظهور عدد قليل من الخلايا البكتيرية .

ج- زراعة البول Urine culture :
تستخدم هذه الخطوة بعد التأكد من وجود الإلتهاب والإصابة لتحديد النوع البكتيري المسبب للإلتهاب , ولذلك لابد من تجهيز الأوساط الغذائية المناسبة لتنمية الكائنات البكتيرية المتوقعة وتوفير جو معقم أثناء القيام بعملية الزراعة .
ويمكن اتباع الطرق التالية لزراعة عينة البول مع ملاحظة وجوب أخذ العينة من البول مباشرة وليس من الراسب الذي تم الحصول عليه من عملية الطرد المركزي .
وسنذكر بإذن الله تعالى الطريقة المفصلة لعملية الفحص وسنركز على الطريقة الدارجة في المعامل التشخشصية الطبية .
تعد هذه الطريقة هي الدارجة في المختبرات الطبية لفحص عينة البول :
1- طريقة التخطيط المباشر Direct streak method :
– باستخدام إبرة التلقيح ذات الحلقة نأخذ من عينة البول بعد خلطها جيداً لتتوزع الخلايا البكتيرية بشكل جيد .
– الزراعة على بيئة CLED أو Trypticase soy broyh لتشجيع نمو الممرضات .
– نقوم بعمل تخطيط متعرج على طبقي بتري يحتوي أحدهما على بيئة آجار الدم Blood agar التي تعتبر بيئة إغناء ملائمة لنمو البكتيريا الموجبة والسالبة لصبغة جرام . وطبق آخر يحتوي على بيئة EMB أوMacconkey agar وهاتين البيئتين تعتبران من الأوساط الغذائية التفريقية حيث أنها ملائمة لنمو البكتيريا السالبة لصبغة جرام فقط كما ويمكن باستخدامها التعرف على البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وذلك من خلال تغير اللون في بيئة Macconkey agar .
– حضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 – 48 ساعة .
– يلاحظ النمو خلال 24 ساعة من حيث النوع والعدد على بيئة آجار الدم ونمو البكتيريا السالبة لصبغة جرام على بيئة EMB فإن لم يظهر نمو تعاد للتحضين لمدة 24 ساعة أخرى وإن لم يظهر نمو فتكون النتيجة سالبة ( no growth after 48 hours ) .
ملاحظة : يمكن استخدام بيئات أخرى بحسب الحاجة مثل استخدام بيئة Thyoglucollate broth لتكثير أعداد البكتيريا إذا كان عددها قليل في البول .
وتستخدم بيئة L.J. media عند الشك بوجود بكتيريا Mycobacterium tuberculosis المسببة لمرض السل فيؤخذ من الراسب ويزرع على هذه البيئة كما يعمل شريحة من الراسب وتصبغ بصبغة Ziehl Neelsen stain ( راجع الصبغة المقاومة للأحماض ) .
كما وتستخدم بيئة SDA الخاصة بالفطريات إذا كان الشك بالإصابة بالفطريات .

2- طريقة الصب Pour plate method :
تستخدم هذه الطريقة لتحديد أعداد الخلايا البكتيرية كما يلي :
– عمل ثلاثة تخفيفات لعينة البول بالماء المقطر والمعقم 1/10 و 1/100 و 1/1000 .
– ينقل 1 مل من كل تخفيف إلى طبق بتري يحتوي على بيئة الآجار المغذي السائلة ثم تخلط العينة فيه ويترك حتى يتصلب .
– تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة ثم تعد المستعمرات وتضرب في معامل التخفيف لكل طبق .
ملاحظة : عند استخدام عينة البول الوسطية وإبرة تلقيح خاصة قطرها 0.001 مل وظهور النتائج بعدد أقل من 1000 خلية / مل يعتبر النمو غير موجود مع ملاحظة وجود نوع واحد من البكتيريا .
أما إذا كان العدد أقل من 10000 خلية / مل فيكون احتمال وجود التهاب بالنظر لوجود الأعراض أيضاً .
أما إن كان العدد مئة ألف خلية لكل مل يكون وجود الإلتهاب مؤكداً . ووجود بكتيريا Staph. aureus وفطر Yeast بأي عدد فهو دلالة مرضية .
وفي حال وجود أكثر من نوع من البكتيريا فإذا كان أحد الأنواع سائداً بنسبة كبيرة فيعتبر هو النوع المسبب للمرض أما إن كان العدد متساوياً لجميع الأنواع وأكثر من 10000 فيعمل لها اختبارات الحساسية للمضادات الحيوية أما إن كان العدد أقل من ذلك فيعتبر تلوثاً للعينة ويفضل إعادة الفحص مرة أخرى للتأكد من النتائج .
= يفضل عمل اختبار الحساسية للمضادات الحيوية للكائنات المسببة للمرض للتمكن من وصف العلاج المناسب للمريض وكذلك اختصاراً للوقت اللازم لتشخيص الميكروب ووصف المضاد الحيوي المناسب لعلاجه .

نتائج الزراعة :
تتم بعدة خطوات :
أولاً : تحديد نوع الكائن الموجود في عينة البول :
يتم ذلك بعد عملية الزراعة للتعرف على الكائن المسبب للمرض و باتباع الخطوات التالية :
– دراسة الصفات للمستعمرات مثل اللون والشكل .
– عمل صبغة جرام للتعرف على شكل الخلايا وترتيبها ونوعها من حيث كونها موجبة أم سالبة للصبغة .
– إجراء الفحوصات البيوكيميائية للتحديد النهائي للكائن المسبب للمرض وتتم كما يلي :
• ظهور النمو على بيئة Blood agar وعدم ظهوره على بيئة Macconkey أو EMB يعني ذلك أن البكتيريا النامية موجبة لصبغة جرام ( يحدد ذلك أيضاً بإجراء عملية الصبغ للتعرف على شكل الكائن النامي عصوياً كان أم كروياً وترتيب الخلايا ) فإذا ظهر شكل الخلايا كروية فقد يكون عنقودياً دلالة على وجود بكتيريا Staphylococcus أو يكون على شكل سلسلة دلالة على بكتيريا Streptococcus . وللتمييز بين النوعين الأخيرين يمكن عمل اختبار الكاتاليز Catalase test .
• كما يمكن ملاحظة بعض الصفات باتباع الجدول التالي :

صفات نوعي البكتيرياوجه المقارنة Staphylococcus Streptococcus
النمو على Blood agar + +
النمو على EMB و Macconkey _ _
فحص الكاتاليز + –
حجم المستعمرات 3 – 5 ملم 1 – 2 ملم
صبغة جرام + +
تحليل الدم غير محللة ماعدا
Staph. aureus معظمها محللة للدم
شكل ولون المستعمرات محدبة بيضاء إلى أصفر ذهبي قرصية أبيض

* ظهور النمو على بيئة Blood agar و ظهورها على بيئة Macconkey أو EMB
أيضاً يعني ذلك أن البكتيريا النامية سالبة لصبغة جرام ( يحدد ذلك أيضاً بإجراء عملية
الصبغ ) .
* ويتم معرفة ما إذا كانت البكتيريا مخمرة لسكر اللاكتوز أم لا من خلال ملاحظة بيئة Macconkey من خلال ظهور اللون الوردي .
فالبكتيريا المحللة للسكر هي : E.coli , Klebsiella , Enterobacter , Citrobacter .
والبكتيريا غير المحللة هي : Salmonella , Shigella , Proteus , Pseudomonas .
* يتم التمييز بين E.coli و Enterobacter على وسط EMB بظهور اللون الأخضر اللامع المميز لبكتيريا E.coli .
* أما بكتيريا Proteus فتتميز بالنمو المنتشر الواسع spreading growth على جميع الأوساط السابقة .
* ويتم تمييز Klebsiella من المستعمرات المخاطية على كلا البيئتين السابقتين .
* أما الفطريات وخاصة فطر Candida فتظهر مستعمراتها مشابهة لمستعمرات بكتيريا Staph. على كلا البيئتين السابقتين . إلا أنه عند عمل صبغة جرام للفطر وفحص Ctalase و Coagulase فإن الفطر لا يأخذ الصبغة ويعطي نتيجة سالبة للإختبارين السابقين .