فحص حركة البكتيريا , Bacterial movement , تحميلات النقطة المعلقة والمبللة , Wet and Hanging drop mo

تمهيـد :
يصعب في بعض الأحيان دراسة الخلايا البكتيرية غير المصبوغة تحت المجهر نظراً لشفافيتها وعدم تمييزها عن الشريحة الزجاجية إلا أن هناك مميزات يمكن أن نعتمد عليها مثل الحركة أو تكوين المجموعات ذات أبعاد ثلاثية للخلايا وهذه تتضح فقط بالفحص المباشر للبكتيريا المعلقة في الوسط السائل حيث تهدف هذه العملية إلى فحص حركة البكتيريا Motility of bacteria حيث أن بعض أنواع البكتيريا لها أسواط flagella أو أهداب تساعدها على الحركة و هذه الحركة تعرف بالحركة الحقيقية ومنها ما هو براوني ناتج عن تأثر الخلية البكتيرية باهتزازات السائل الموجودة فيه .

المواد والأدوات اللازمة:
1- نقيع التبن Hay infusion .
2- مزرعة من بكتيريا Escherichia coli ( متحركة في العادة ) أو Proteus vulgaris (المزارع الحديثة أكثر حركة ) بحيث يكون عمر المزرعة من 6-12 ساعة .
3- مزرعة من بكتيريا Enterobacter aergenes عمرها من 6-12 ساعة وهي تشبه E.coli في الشكل إلا أنها غير متحركة .
4- مزرعة Sarcina flava ( توضح تكوين مجموعات الخلايا ذات الأبعاد الثلاثية ).
5- شرائح مجوفة , شرائح عادية وأغطية شرائح .

طريقة العمل :
أولا: تحضير النقطة المعلقة Hanging drop باستخدام الشرائح المجوفة :
1- قم بعمل حلقة من المادة اللاصقة ( الفازلين ) حول حواف الشريحة بواسطة عود ثقاب مع مراعاة عدم دخول المادة داخل التجويف .
2- انقل ملء إبرة ذات العقدة من مستخلص التبن أو من المزرعة المراد فحصها وضعها في مركز غطاء شريحة نظيفة ثم ضع الشريحة على الغطاء بحيث تكون النقطة المعلقة في وسط التجويف يراعى أن تكون المزرعة البكتيرية حديثة بعمر 24 ساعة .
3- اضغط على الشريحة بلطف حتى تلتصق تماما بالغطاء الزجاجي ثم اقلب الشريحة بسرعة بحيث يصبح الغطاء إلى أعلى فتصبح النقطة معلقة من الغطاء الزجاجي لفترة تسمح بفحص الخلايا البكتيرية وتساعد المادة اللاصقة على عدم تبخر النقطة بالهواء الجوي .

ثانيا: تحضير النقطة المعلقةعلى شريحة عادية :
1- اصنع مربعا صغيرا داخل شريحة زجاجية مستخدما لذلك أعواد ثقاب بها المادة اللاصقة ( الفازلين ).
2- حضر النقطة المعلقة على غطاء شريحة وعلقها على تجويف المربع كما اتبع مع الشريحة المجوفة .
3- إن القوة الكبرى x 40 للعدسة الشيئية سوف تعطي نتائج حسنة للفحص ويمكن مع أخذ الحيطة استخدام العدسة الزيتية أيضا , وكذلك مراعاة كثافة الضوء أثناء الفحص باستخدام الحجاب القزحي للمكثف .
4- افحص وارسم الخلايا البكتيرية للمزارع الأربع ثم ارسم حركة البكتيريا كما تظهر أمامك .

ثالثا: التحميل الرطب ( المبلل ) Wet mount :
تستخدم هذه الطريقة في كثير من الفحوصات المبدئية خاصة في مجال الفحوص الميكروبية الطبية لمعرفة المسبب للإصابة بشكل مبدئي فمثلاً يمكن التعرف على البكتيريا أو مشاهدة الخيوط الفطرية أو وجود خلايا الدم كمؤشر لحدوث الإلتهاب .

طريقة العمل :
1- ضع نقطة من معلق بكتيري أو من مزرعة بكتيرية سائلة على سطح شريحة عادية أو يمكن استخدام نقطة من محلول ملحي ومزج كمية قليلة من الخلايا البكتيرية خاصة إذا أخذت العينة من وسط صلب كما يمكن خلط كمية من النمو مع كمية من المحلول الملحي في أنبوب لعمل معلق بكتيري ثم وضع قطرة منه على شريحة وفحصها كم ويمكن أخذ العينة مثل أحد سوائل الجسم وفحصها مباشرة من خلال استخدام هذه الطريقة كما سير معنا لاحقاً.
2- غط النقطة بغطاء شريحة رقيق .
3- افحص الشريحة بالعدسة الكبرى ثم بالعدسة الزيتية لملاحظة الحركة في البكتيريا أو مشاهدة الخيوط الفطرية .
ويمكن استخدام المجهر ذو الأطوار المتباينة لرؤية الحركة وكذلك لمشاهدة تجمعات الخلايا البكتيرية . و تعد هذه الطريقة من أسرع الطرق ومما يؤخذ على هذه الطريقة سرعة جفاف التحضير .

رابعا: طريقة الآجار نصف الصلب :
1- لقح آجار عميق نصف صلب بالوخز بواسطة إبرة تلقيح مستقيمة .
2- حضن الأنابيب عند 37 ْم لمدة 48 ساعة .
3- لاحظ طبيعة النمو على طول خط الوخز بعد التحضين للتأكد من حركة البكتيريا