طرق وكيفية عزل الكائنات الحية الدقيقة من الأوساط البيئية المختلفة Isolation of microorganisms

إن الكائنات الحية الدقيقة توجد في جميع الأوساط البيئية المحيطة بنا في المياه وفي التربة وفي الهواء وعلى أجسام الكائنات الحية الأخرى وداخلها وكذلك توجد في كل مكان يتوقع عدم وجودها فيه ومعظم هذه الكائنات غير مسببة للضرر وبعضها يسبب الأضرار والأمراض للكائنات الحية الأخرى كالإنسان والحيوان والنبات وبعضها يكون مفيدا.ً وبالرغم من ذلك يجب أخذ الحيطة والحذر أثناء التعامل مع هذه الكائنات داخل المعمل ويمكن عزل الكثير من أنواع البكتيريا و الفطريات الموجودة في الأوساط المحيطة بنا ولكن الفطريات بصورة أبطأ .
لدراسة البكتيريا والفطريات المتواجدة في الأوساط البيئية المختلفة والتعرف على أنواعها يجب عزلها للقيام بإجراء الدراسات والأبحاث اللازمة في مختلف المجالات في خطوات لاحقة لعملية العزل . وقد تم تكرار هذا الجزء في الكتاب لأهميته وكذلك كتطبيق من التطبيقات المهمة في الدراسات الميكروبية .
ومن هذه الأوساط البيئية التي يمكننا الحصول منها على الفطريات والبكتيريا على سبيل المثال الهواء والماء والتربة والمواد الغذائية .
ويلزم لذلك :

المواد والأدوات اللازمة :
بيئة الآجار المغذي المسال – بيئة دوكس للفطريات – أنابيب اختبار معقمة – أطباق بتري – ماء مقطر ومعقم – ماصات معقمة- لهب- حامل أنابيب- ميزان – تربة.

خطوات العمل :

أولا: عزل بكتيريا وفطريات الهواء :
1- نحضر أطباق بتري ونصب بها 20 مل من بيئة الآجار المغذي للبكتيريا وأطباق أخرى نصب بها بيئة شابكس دوكس آجار للفطريات والمحضرة مسبقاً ونتركها لكي تتصلب .
2- نأخذ طبقين لعزل البكتيريا و آخرين لعزل الفطريات ونعرض أحدها إلى هواء المعمل والآخر إلى الهواء الخارجي لكلا النوعين وذلك لمدة 10 دقائق . ( يمكن تعريض أطباق أخرى لمناطق زراعية أو سكنية ) .
3- نضع الطبقين في الحضان عند 37 ْم لمدة تتراوح بين 24-48 ساعة بالنسبة للبكتيريا و عند 33 ْم لمدة 4-5 أيام بالنسبة للفطريات.
4- نأخذ النتائج التي نحصل عليها ونسجلها.
يلاحظ النمو وكميته للمقارنة بين الأماكن المختلفة و ذلك بعد المستعمرات في كل طبق ومن خلال العدد الناتج يحدد أي المكانين أكثر تلوثاً وكذلك يحكم على البكتيريا والفطريات أيهما أكثر انتشاراً في البيئة .

ثانياً: عزل بكتيريا وفطريات التربة : ويتم ذلك بطريقتين
أ‌- طريقة ووركب Woorcap technique:
1- نأخذ عدة أطباق بتري ونضع في كل منها 20مل من البيئة المسالة ثم نوزن 0.1 جرام من التربة وننشرها على سطح البيئة وذلك في كل طبق من الأطباق قبل تصلب الوسط الغذائي فيه .
2- نقوم بتحريك الأطباق بشكل دائري مع عقارب الساعة ثم عكس عقارب الساعة عدة مرات لخلط البيئة مع التربة .
3- حضن الأطباق كما في الخطوة السابقة ثم لاحظ النمو .
يلاحظ النمو كما في عزل كائنات الهواء .

ب‌- طريقة التخفيف Dilution technique :

1- نعمل تخفيفات للتربة وذلك باستخدام خمسة أنابيب معقمة ومحتوية على 9مل من الماء المقطر المعقم نضع 1 جم من التربة في الأنبوب الأول لعمل تخفيف للتربة ويكون التخفيف هنا 1/10 .
2- نأخذ باستخدام ماصة معقمة 1 مل من الأنبوب الأول ونضيفه إلى الأنبوب الثاني فيصبح به 10 مل ويكون تركيزه 1/100 .
3- نكرر العملية مع الأنبوب الثالث فيصبح تركيزه 1/1000 .
4- نكرر العملية مع الأنبوب الرابع فيصبح تركيزه 1/10000 .
5- نكرر العملية مع الأنبوب الخامس فيصبح تركيزه 1/100000 .
6- نأخذ من الأنابيب الثلاثة الأخيرة 0.1 مل من كل أنبوب ونضعها في ثلاثة أطباق ( استخدام التراكيز الثلاثة الأخيرة ) ونقوم بفردها على سطح البيئة باستخدام مرود قطني طبي معقم أو ساق زجاجية معقوفة أو نكرر ما فعلناه في طريقة ووركب .
7- حضن الأطباق كما سبق ثم لاحظ النمو على الأطباق .
ملاحظة :
1- يمكن مراجعة المواد المستخدمة في التخفيف وطريقته المذكورة مسبقاً في عزل بكتيريا التربة .
2- يجب التأكد من كتابة المعلومات على الأطباق باستخدام قلم خطاط لكي لا تختلط الأطباق ببعضها . ويلاحظ النمو من خلال عد المستعمرات في كل تخفيف ثم ضرب عدد المستعمرات الناتجة من كل طبق في مقلوب التخفيف لكل طبق فيعطي ذلك عدد الخلايا الموجودة في 1 مل من التربة .
3- يمكن بناء خطوات دراسية وبحثية أخرى على هذه الخطوات السابقة بحسب ما يلزم للدارس أو الباحث .

ثالثاً: عزل بكتيريا وفطريات الماء :
1- نأخذ أربعة أطباق ونضع في كل منها 1 مل من ماء الصنبور باستخدام ماصة معقمة و يراعى أخذ عينة الماء كما سبق .
2- نضيف في طبقين منها 20 مل من بيئة البكتيريا الآجار المغذي وفي الطبقين الآخرين 20 مل من بيئة الفطريات شابكس دوكس آجار ونحركها ليتم خلط العينة بالوسط الغذائي .
3- نترك الأطباق بعض الوقت حتى يتم التصلب .
4- ضع الأطباق في الحضان حسب درجة الحرارة الملائمة للبكتيريا والفطريات .
راعي ضرورة استخدام أساليب التعقيم أثناء العمل .
يلاحظ بعد التحضين عدد المستعمرات النامية بالنسبة للبكتيريا وكذلك بالنسبة للفطريات كما يمكن استخدام نفس الطريقة لعزل بكتيريا وفطريات الماء من مصادر مختلفة مثل المستنقعات أو أي مصدر مائي آخر .
جبل عالي