دراسة بكتيريا التربة , دراسة البكتيريا العقدية , soil bacteriology

تشترك بعض أنواع البكتيريا من جنس Rhizobium مع جذور النباتات البقولية في تثبيت النيتروجين الجوي بطريقة تكافلية Symbiotic nitrogen fixation ونتيجة معيشة هذه البكتيريا على جذور النباتات تظهر على الجذور عقداً مختلفة الشكل والحجم هي عبارة عن نموات من الجذور تحوي بداخلها خلايا البكتيريا ولهذه البكتيريا أهمية من الناحية الزراعية حيث أنها توفر على المزارع القيام بتسميد محاصيله البقولية بالأسمدة النيتروجينية وكذلك تزيد من خصوبة التربة .

خطوات العمل :
1- افصل عقدة جذرية من جذر نبات بقولي وضعها بأنبوبة تحتوي على محلول منظم لمدة ثلاث دقائق .
2- ترفع العقدة بواسطة ملقط معقم ثم تغسل جيداً بالماء المعقم عدة مرات .
3- تنقل العقدة إلى طبق بتري معقم به 3 مل ماء معقم وتهرس العقدة بإبرة تشريح ومشرط معقمين .
4- يستعمل المعلق الناتج في تحضير أغشية وذلك بأخذ ملء عقدة من إبرة تلقيح وفرده على شرائح نظيفة .
5- يترك الغشاء يجف في الهواء ثم يثبت بالحرارة .
6- بعد أن تبرد الشريحة اصبغ الغشاء بصبغة الأرثروسين الفينولية Carbol erythrosin لمدة خمس دقائق .
7- تغسل الشريحة بالماء وتترك لتجف ثم تفحص بالعدسة الزيتية لاحظ أن الأشكال المختلفة للخلايا البكتيرية المفحوصة والتي تسمى لذلك بالبكتيرويدات Bacteroides
8- صب بيئة أحمر الكونجو Congo red medium في أطباق بتري واتركها تتصلب .
9- لقح سطح آجار أحمر الكونجو بواسطة تخطيطه بمعلق البكتيريا السابق تحضيره .
10- ضع الأطباق بالحضان عند 30 ْم لمدة 4-7 أيام وبعد ذلك افحص النمو الناتج
( مستعمرة ال Rhizobia تكون مستديرة مرتفعة لامعة بيضاء تصبح طباشيرية
بزيادة عمر المستعمرة ) .
11- حضر غشاء من المستعمرات الناتجة وثبته حرارياً واصبغه بصبغة جرام وافحصه
بالمجهر .
12- قارن شكل الخلايا الناتجة في هذه الحالة بالبكتيرويدات السابق فحصها .

اختبار اختزال النترات
قد تختزل النترات الموجودة في الأرض تحت الظروف اللاهوائية بفعل أنواع من البكتيريا فتحوله بعض الأنواع إلى نيتريت والبعض يختزل النيتريت إلى نشادر ولإجراء هذا الإختبار نتبع ما يلي :

خطوات العمل :
1- يؤخذ 1 جم من التربة المراد فحصها وتضاف إلى 9 مل من الماء المقطر والمعقم ثم ترج جيداً لمدة دقيقتين لفصل البكتيريا عن حبيبات التربة .
2- تلقح أنابيب درهام محتوية على بيئة نترات الجلوكوز بـ 1 مل من معلق التربة مع ترك واحد بدون تلقيح .
3- تحفظ الأنابيب عند 30 ْم لمدة أسبوع .
4- يحضر غشاء من كل أنبوبة ويصبغ بصبغة جرام وتختبر الأنابيب لوجود النترات والنيتريت والنشادر كما يلي :
أ ) للكشف عن النشادر : يوضع قطرتين من المزرعة في بوتقة خزفية بيضاء ثم يضاف
قطرة من كاشف نسلر فإذا تكون راسب أصفر دل على وجود النشادر.
أ‌) للكشف عن النيتريت : يوضع 3 نقط من كاشف ترومسدورف في طبق خزفي ثم يضاف
نقطة من حمض الكبريتيك المخفف 3:1 ثم يضاف نقطة من المزرعة فإذا تكون لون
أزرق دل ذلك على وجود النيتريت .
جـ) للكشف عن النترات : ضع كمية من المزرعة في أنبوب ثم ضع كمية مماثلة من الكحول
وكبريتات النشادر 25% مع إضافة 10 نقط من حمض الخليك ثم تسخن للتخلص من
النترات . بعد التسخين توضع نقطة من المخلوط في طبق خزفي ثم يضاف إليها نقطة
من كاشف داي أمين ثم نقطة من حمض كبريتيك مركز فإذا تكون لون أزرق دل ذلك
على وجود النترات .