تاثير المواد الكيميائية والمطهرات والمضادات الحيوية , Chemical , Antiseptic and Antibiotic action

إن الكثير من المواد المختلفة يكون لها تأثير على الكائنات الحية من حيث طبيعتها والتأثير على طبيعة حياتها أو القضاء عليها مثل المطهرات والمعقمات ( الفينولات والكحولات و الكلوريدات والهالوجينات ) والعناصر الثقيلة ( النحاس والفضة والزئبق وغيرها ) والمواد العلاجية ( المضادات الحيوية ) والصبغات ( الكريستال البنفسجي واليود ) وهذه المواد تفيدنا في التحكم ومكافحة الكائنات الدقيقة المسببة للفساد والأمراض .
وتؤثر هذه المواد على الكائنات الدقيقة إما كمثبط للنشاط والنمو Bacteriostatic ( Antiseptic ) وإما كقاتل لها Bactericidal ( Disinfectant ) , وتستخدم المواد المثبطة للنمو كمطهر للجلد بحيث توقف النمو البكتيري .
ويتم التأثير لهذه المواد بحيث تؤدي إلى تخثر البروتينات الأساسية بالكحولات وتتأكسد بتأثير الكلور أما الفورمالدهيدات فإنه يتحد مع مجاميع الأمين في البروتينات بينما تتحد المعادن الثقيلة مثل الزئبق والفضة مع البروتين وتثبط الإنزيمات وتؤثر الفينولات ومركبات الأمونيوم الرباعية على الغشاء السيتوبلازمي .
ويصبح كثير من هذه المواد عديم التأثير بوجود تركيزات مرتفعة من المادة العضوية أو المنظفات .

** تأثير العناصر الثقيلة ( النحاس والفضة ) :
خطوات العمل :
1- صب بيئة الآجار المغذي في عدد من الأطباق واتركها حتى تتصلب .
2- باستخدام مرود قطني معقم خذ مسحة من معلق بكتيري سبق تحضيره ثم انشر البكتيريا على جميع سطح البيئة . ( يمكن القيام بهذه العملية بطريقة أخرى وذلك بأخذ طبق يصب فيه الوسط الغذائي ويضاف إليه 1 مل من المعلق البكتيري ثم يترك ليتصلب ) .
3- خذ بلورة من كبريتات النحاس وضعها في منتصف الطبق و بلورة أخرى من نترات الفضة وضعها في منتصف طبق آخر ( يمكن وضع قطعة معدنية نحاسية في طبق وأخرى فضية وفي الطبق الثالث مسمار في وسط الطبق ) .
4- حضن الأطباق عند 35 ْم لمدة 24-48 ساعة .
5- بعد التحضين لاحظ المناطق الخالية من النمو حول البلورات أو القطع المعدنية .

** تأثير المعقمات مثل الكحول والفينول والكلوريدات :
خطوات العمل :
1- خذ طبق به آجار مغذي متصلب وانشر عليه بكتيريا بمرود قطني معقم ثم قسم الطبق إلى ثلاثة أقسام متساوية .
2- خذ قطع مستديرة من ورق الترشيح واغمر إحداها بالكحول والأخرى بالديتول والثالثة بالكلور( الكلوركس ) وضعها في منتصف كل قسم في الطبق .
3- كرر العملية ولكن باستخدام أنواع مختلفة من البكتيريا .
4- حضن الأطباق عند 35 ْم لمدة 24-48 ساعة ثم لاحظ النمو حول أوراق الترشيح .

** تأثير الأصباغ على النمو البكتيري ( الكريستال البنفسجي و اليود ) :
بعض الأصباغ مثل الكريستال البنفسجي عند وجوده بتركيز منخفض يكون له تأثير مثبط لنمو البكتيريا الموجبة لصبغة جرام ولا تؤثر على البكتيريا السالبة لصبغة جرام ولذلك تعتبر هذه الصبغة من الصبغات المستخدمة في البيئات الإختيارية أما صبغة اليود فتعتبر من الصبغات المثبطة للنمو البكتيري بصفة عامة .

خطوات العمل:
1- خذ طبق به آجار مغذي متصلب وانشر عليه بكتيريا موجبة لصبغة جرام بمرود قطني معقم ثم قسم الطبق إلى قسمين متساويين ثم خذ طبق آخر وكرر العملية ولكن باستخدام بكتيريا سالبة لصبغة جرام .
2- خذ قطع مستديرة من ورق الترشيح واغمر إحداها بصبغة الكريستال البنفسجي والأخرى باليود وضعها في منتصف كل قسم في الطبق .
3- حضن الأطباق عند 35 ْم لمدة 24-48 ساعة . لاحظ النمو حول أوراق الترشيح لمعرفة تأثير الصبغتين المستخدمتين على كلا النوعين من البكتيريا .
ملاحظة : طريقة المقارنة في مثل هذه الحالة لاتعتبر دقيقة إذا أريد نتائج دقيقة من هذه الدراسة وللحصول على مقياس حقيقي لدرجة التثبيط والقتل نأخذ بعين الإعتبار تركيز الميكروبات وتركيز المواد القاتلة ودرجة الحرارة ومدى تفاعل المواد المستخدمة مع الوسط الغذائي .
ملاحظة : يمكن اجراء هذه التجربة بعمل تراكيز مختلفة لصبغة الكريستال البنفسجي لدراسة تأثير التركيزات المختلفة لهذه الصبغة ثم تلقيح أطباق بتري محتوية على بيئة الآجار المغذي مضافاً لها التركيزات المختلفة ثم ازرع عليها نوعين مختلفين من البكتيريا وبعد التحضين تؤخذ النتائج للتعرف على مدى تأثر الأنواع المختلفة من البكتيريا بتركيزات الصبغة .

** تأثير المضادات الحيوية :
يستخدم هذا الإختبار في مجال واسع في تطبيقات الأحياء الدقيقة وخاصة الطبية منها وتتم بعدة طرق تهدف جميعها إلى معرفة مدى حساسية النوع البكتيري لمضاد معين أو لتحديد المضاد الحيوي المناسب لاستخدامه كعلاج ضد النوع المسبب للمرض كما سيرد لاحقاً .

خطوات العمل :
1- خذ طبق به آجار مغذي متصلب ( يفضل في حال فحص عينة مرضية استخدام بيئة آجار التحسس Sensitivity agar ) وانشر عليه بكتيريا بمرود قطني معقم تكون من مزرعة نقية غير مختلطة .
2- خذ أقراص من المضاد الحيوي ( جاهز ) وضع الأقراص موزعة في الطبق بالتساوي . ( يمكن استخدام مضاد حيوي من الصيدلية وحله في ماء مقطر واستخدامه إذا لم تتوفر أقراص المضاد الحيوي ) .
3- كرر العملية باستخدام أنواع مختلفة من البكتيريا وأنواع مختلفة من المضادات .
4- حضن عند 35 ْم لمدة 24 ساعة .

يظهر تأثير المضادات الحيوية بظهور منطقة تثبيط النمو حول أقراص المضاد الحيوي .

تثبيط النمو بالسلفانيلاميد :
تعمل مركبات السلفا كمواد كيميائية مثبطة لنمو البكتيريا من خلال تعطيل بناء بعض المواد التي تكونها البكتيريا أو تحتاجها في نموها ولذلك تعرف هذه المركبات بمثبطات التمثيل الغذائي Antimetabolites .

طريقة العمل :
1- لقح البيئات التالية باستخدام 0.1 مل من مزرعة E.coli :
أ‌- بيئة الكفاف السائلة minimal broth فقط .
ب‌- بيئة الكفاف + 0.01 مولر سلفانيلاميد .
ج- بيئة الكفاف + 0.01 مولر سلفانيلاميد + 2×10-8 مولر حامض باراأمينوبنزويك .
د- بيئة الكفاف + 0.01 مولر سلفانيلاميد + 2×10-7 مولر حامض باراأمينوبنزويك .
هـ- بيئة الكفاف + 0.02 مولر سلفانيلاميد + 7×10-5 مولر حامض فوليك .
2- حضن لمدة يومين عند 37 ْم .
3- رج النابيب لتوزيع النمو بشكل جيد ثم قارن كثافة النمو .

نلاحظ بعد التحضين أنه بزيادة تركيز مركب السلفا تقل كمية النمو حتى تنعدم , أما الأنابيب التي استخدمنا فيها حامض الفوليك فيكون النمو بصورة أفضل من الأنابيب الأخرى .