دراسة بكتيريا المياه , water bacteria

تختبر بكتيريا المياه عادة وخاصة مياه الشرب للتأكد من عدم وجودها وخاصة الممرض منها وللتأكد من صلاحية الماء للإستهلاك . ومن أهم أنواع البكتيريا التي تسبب تلوث للمياه هي بكتيريا القولون والتي يتلوث بها الماء بمصدر من مصادر الصرف الصحي وقبل الدراسة يراعى ما يلي :
بالنسبة لعينة الماء الموجودة في خزانات الشرب فيحضر أوعية ذات سدادة معقمة جيداً وتفتح تحت سطح الماء حتى لا تتعرض للهواء ثم تغلق تحت سطح الماء أيضاً مع مراعاة عدم ملئها تماماً حتى يسهل رجها عند أخذ العينات داخل المعمل .
أما بالنسبة لمياه الصنبور فيفتح الصنبور لمدة دقيقتين قبل أخذ العينة , ويجب فحص العينات مباشرة أو حفظها في الثلاجة حتى يتم فحصها لاحقاً على ألا تزيد فترة الحفظ عن 12 ساعة .
ويمكن دراسة بكتيريا المياه بإجراء الإختبارات التالية :

أولا: العد الكلي :
خطوات العمل :
1- حضر التخفيفات التالية من العينة 1/10 و 1/ 100 .
2- ضع 1 مل من كل تخفيف في طبق بتري .
3- صب في كل طبق بيئة آجار مغذي ثم اخلطه مع العينة جيداً ثم اترك البيئة لتتصلب .
4- حضن الأطباق عند 28 ْم لمدة 48 ساعة ثم عد المستعمرات الناتجة .

ثانيا : الإختبار التخميني Presumptive test :
يضاف 1 مل من عينة الماء إلى كل من خمس أنابيب درهام كبيرة تحتوي كل منها على 20 مل من بيئة مرق تخمر اللاكتوز وينقل أيضاً 1 مل من عينة الماء إلى أنبوبة درهام صغيرة بها 5 مل من بيئة مرق تخمر اللاكتوز . تحفظ الأنابيب على درجة حرارة 37 ْم وتفحص بعد 24 ساعة للتأكد من وجود حمض وغاز في الأنبوبة الداخلية لأنبوبة درهام ويكون هنا الإختبار التخميني موجباً , والأنابيب التي لم تعطي نتيجة فتترك لمدة 24 ساعة أخرى فإذا أعطت نتيجة يكون هذا الإختبار مشكوكٌ فيه , أما إذا لم نحصل على نتيجة خلال 48 ساعة فيكون الإختبار سالباً أي عدم وجود بكتيريا الكوليفورم .
وتحفظ الأنابيب التي تحتوي على غاز لإجراء الإختبار التأكيدي .
ملاحظة : يمكن التعرف على تكون الحمض من تغير لون دليل البروموثيمول الأزرق Bromothymol bhue إلى اللون الأصفر , والغاز من ظهور فراغ في الأنبوب الداخلي لأنبوب درهام.

http://www.marietta.edu/%7Espilatrs/biol202/labresults/purple_broth.jpg

ثالثا: الإختبار التأكيدي Confirmed test :
تستعمل أنبوبة من أنابيب الإختبار التخميني السابق والتي تحتوي على غاز في تلقيح طبق من بيئة آجار اندو وطبق آخر به بيئة آجار إيوسين أزرق الميثيلين (EMB) Eosin methylene blue agar بطريقة التخطيط البسيط .
تحضن الأطباق على درجة حرارة 37 ْم , وتفحص الأطباق بعد 24-48 ساعة للتعرف على وجود مستعمرات غامقة في منتصفها وذات بريق معدني على بيئة إيوسين أزرق الميثيلين وذات لون أحمر مخضر على بيئة إندو آجار وهي بكتيريا E.coli , فإذا وجدت يجرى عليها الإختبار التكميلي .
ملاحظة : تكون مستعمرات بكتيريا Escherichia coli ( ايشيريشيا كولاي ) مستديرة و ذات مركز أسود و بريق معدني مخضر وقطر 2-3 ملم على بيئة آجار إيوسين أزرق الميثيلين , وذات لون احمر ولمعة خضراء في بيئة آجار اندو .

https://lh5.googleusercontent.com/-6wsD56GcKTg/T_CRT0ctnoI/AAAAAAAAAwY/cy7t6CwNMg0/s640/%25D8%25B5%25D9%2588%25D8%25B1%2520%25D8%25AA%25D8 %25B7%25D8%25A8%25D9%258A%25D9%2582%25D9%258A%25D8 %25A9%2520033.jpg

رابعا : الإختبار التكميلي Completed test :
ينقل جزء من المستعمرة التي لها صفات ايشيريشيا كولاي إلى أنبوبة درهام بها بيئة مرق تخمر اللاكتوز وأنبوبة آجار مغذي مائل .
تحضن الأنابيب عند درجة حرارة 37 ْم وتفحص بعد 24-48 ساعة للتأكد من تكون غاز وحمض من تخمر اللاكتوز , ويعمل غشاءاً بكتيرياً من نفس الطبق للتأكد من وجود بكتيريا عصوية سالبة لصبغة جرام يدل على وجود الE.coli .
بعد ذلك تختبر المزرعة النامية على الآجار المغذي المائل للقدرة على تكوين مركبات الإندول و أحمر الميثايل وفوجس_ بروسكاور والسترات , في اختبار يسمى (IMVIC) فإذا أعطت النتائج التالية فتعتبر E.coli وهذا تأكيداً على تلوث الحليب .
}اندول + , احمر ميثايل + , فوجس_بروسكاور – , السترات – { .

اختبار السترات :
تستخدم بعض أنواع البكتيريا السترات كمصدر وحيد للكربون والطاقة وهذه الخاصية تستخدم لتمييز بعض العصويات السالبة لجرام وتستخدم بيئة سيمون لآجار السترات المحتوية على دليل بروم كريزول بيربل لهذا الفحص .
حيث تقوم بعض أنواع البكتيريا بتحليل أملاح السترات بواسطة إنزيم الستراتيز وتحوله إلى كربونات الصوديوم القاعدية التي تعطي لوناً أزرقاً بوجود الدليل .
خطوات العمل :
1- لقح أنبوبة من بيئة آجار سيمون Simmons citrate agar بنوع من البكتيريا .
2- حضن عند 37 ْم لمدة 48 ساعة .
3- عند ظهور نمو يدل ذلك على أن الإختبار موجب ويلاحظ أيضاً من تغير لون الدليل من اللون الأخضر إلى اللون الأزرق .