دراسة الفطريات , Fungi of Studying , عزل الفطريات , Fungi isolation
تـمـهـيد :
تنتشر الفطريات في كثير من الأوساط البيئية بشكل كبير ولايكاد يخلو مكان من وجود نوع أو أكثر من الفطريات أو جراثيمها , ويتراوح حجمها من الخلية المفردة مثل الخميرة Yeast إلى خيطية عديدة الخلايا إلى عديدة الخلايا كبيرة الحجم يمكن مشاهدتها بالعين المجردة مثل فطرعيش الغراب وتعتبر الفطريات غير ذاتية التغذية . لذا من المهم أن نقوم بدراسة هذه الكائنات وعزلها ويلزم ذلك – كما في البكتيريا – تحضير وسط غذائي مناسب لنموها وتوفير الظروف البيئية المناسبة لنموها.
تحضير بيئة الفطريات :
تسمى البيئة الغذائية المستخدمة لتنمية الفطريات ( الأكثر استخداماً )
“” ببيئة تشابكس دوكس آجار Chapex dox agar “” .
مكونات بيئة الفطريات :
1- ملح كلوريد البوتاسيوم KCl 0.5 جم/ل
2- ملح نترات الصوديوم Na2No3 2 جم/ل
3- كبريتات المغنيسيوم MgSO4 0.5 جم/ل
4- فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاس KH2PO4 1 جم/ل
5- جلوكوز 10 جم/ل
6- آجــار 17 جم/ل
7- روز بنغال ( يستعمل كمضاد لمنع نمو البكتيريا ) 10 مل/ل
تضاف هذه الكميات إلى لتر من الماء المقطر .
** نتبع نفس الخطوات التى تم بها تحضير الوسط الغذائي البكتيري (الآجار المغذي ) .
عـزل الـفـطـريــات من التربة والهواء Fungi isolation :
المواد والأدوات اللازمة :
عينات مختلفة من التربة – أطباق بتري – ماصات معقمة – بيئة فطريات جاهزة – ميزان – لهب – أنابيب اختبار تحتوي على 9 ملل ماء مقطر ومعقم – حامل أنابيب .
خطوات العمل :
أولا:عزل فطريات التربة : ويتم ذلك بطريقتين هما :
1- طريقة ووركب :
*- نوزن 0.1 جم من التربة ونضعها في طبق بتري بالقرب من اللهب .
*- نصب بيئة الفطريات في الطبق بالقرب من اللهب ونرجه بحركة دائرية لليمين واليسار لخلط التربة بالبيئة .
*- نترك الطبق حتى يتصلب ثم نضعه في الحضان لمدة 3-4 أيام عند 28 درجة مئوية.
2- طريقة التخفيفات DILUTION METHOD :
*- نوزن 1 جم من التربة ونضعها في الأنابيب الخمسة المحتوية على الماء المقطر والمعقم تتابعاً بنفس الخطوات المستخدمة في عملية التخفيف كما في تجربة عزل بكتيريا التربة.
*- بعد التخفيف نضع 1 ملل من كل تخفيف في طبق بتري ثم نضيف عليه بيئة الفطريات ونحركها ليتم خلط العينة بالوسط الغذائي ثم نترك البيئة حتى تتصلب .
*- نحضن الأطباق في الحضان لمدة 3-4 أيام عند 28 ْم.
ثانيا: عزل فطريات الهواء :
1- نصب بيئة الفطريات في أطباق بتري ونتركها حتى تتصلب .
2- نفتح الأطباق في عدة أماكن مختلفة لمدة 10 دقائق ( في المعمل و مكان زراعي إن وجد أو في أي مكان خارج المعمل ) .
3- نحضن الأطباق لمدة 3-4 أيام عند 28 ْم , ثم نأخذ النتائج .
عزل الفطريات وحيدة الخلية ( الخمائر Yeast ) :
يمكن عزل الخمائر بشكل عام من التحضيرات التجارية أو من أي عينة كما يلي :
المواد والأدولت اللازمة :
خميرة الخبز – طبق بيئة دكستروز الآجار أو آجار مغذي مضاف له 5 % سكروز – أنبوبة اختبار تحتوي على 5 مل ماء صنبور .
خطوات العمل :
1- ضع ربع جم من الخميرة في الأنبوب المحتوي على ماء الصنبور .
2- رج الأنبوبة جيداً حتى تختلط المواد ببعضها .
3- خطط طبق بتري يحتوي على بيئة دكستروز الآجار أو آجار مغذي مذاب به السكروز .
4- حضن الطبق عند 35 ْم لمدة 48 ساعة ثم افحص العينة تحت المجهر .
5- لعزل الخمائر من التربة نتبع الطرق المذكورة سابقاً في خطوات عزل البكتيريا والفطريات وخاصة الخطوات التي تتعلق بالتعامل مع العينة مثل التخفيف والتخطيط وغيرها . ثم نقوم بزراعة العينة على الأطباق بالتخطيط .
6- نلاحظ النتائج بعد دراسة خصائص المزرعة ( المذكورة لاحقاً للتعرف على الخمائر ) ثم نقوم بعزلها بطريقة نقية من خلال أخذ مستعمرة الخميرة وزراعتها بصورة نقية في طبق خاص للحصول على مستعمرات الخميرة بصورة نقية وللتأكد نفحص المستعمرات بالمجهر .
دراسة خصائص المستعمرات الفطرية :
أشكال المستعمرات الفطرية على أطباق بيئات الزرع
دراسة بعض الشرائح لأنواع من الفطريات مجهرياً .
أولاً: الفطريات البيضية والزيجوتية Oomycetes and Zygomycetes
الشكل العام لفطرعفن الخبز الجرثومة الزيجوية لفطر عفن الخبز Rhizopus
ثانيا: الفطريات الزقية Phaeophyceae :
فطر الخميرة Yeast فطر الأسبرجيلاس
Saccharomyces Aspergillus
فطرالبنسيليوم
Penicillium
الأكياس الزقية في فطر توضيح للأكياس الزقية
البيزايزا Peziza والجراثيم في البيزايزا
ثالثاً : الفطريات البازيدية Pasidiomycetes :
الجسم الثمري في فطرعيش الغراب قطاع رأسي في الخياشيم لفطر
(المشروم ) Agaricus عيش الغراب
الكأس الأسيدي في فطر الوعاء البكنيدي في فطر
صدأ القمح Puccinia صدأ القمح
الجراثيم التيليتية في فطر الجراثيم اليوريدية في فطر
صدأ القمح صدأ القمح
