تجربة استخلاص الإنزيمات المحللة ومنها إنزيم الدياستيز ( الأميليز )

الإنـزيـمات النبـاتـية
الإنزيمات هي مواد عضوية ذات طبيعة بروتينية تنتجها الخلايا الحية وتتخصص هذه الإنزيمات في اتمام تفاعلات كيموحيوية مختلفة .
ولهذه الإنزيمات عدة أنواع بحسب تخصصها في المواد التي تؤثر فيها , فمنها الإنزيمات الهاضمة ومنها إنزيمات التخمر , ومنها الأكسدة والإختزال .
وسوف نقوم ببعض التجارب لاستخلاص بعض إنزيمات النبات والتعرف على بعض التأثيات التي تحدثها على المواد .
الهدف من التجربة :
استخلاص الإنزيمات المحللة ومنها إنزيم الدياستيز ( الأمليز ).
الأدوات والمواد اللازمة :
حبوب قمح – هاون خزفي – ورق ترشيح – محلول اليود – طبق ذو فجوات – محلول فهلنج أ و ب – أنابيب اختبار .
طريقة العمل :
1-استنبت حبوب القمح ثم اصحن كمية من هذه الحبوب في هاون خزفي مع قليل من الرمل النظيف ثم أضف إليها أربعة أمثال حجمها ماء مقطر .
2-اترك هذا الخليط لمدة ساعتين في الثلاجة ثم رشح ( يكون الخليط في هذه الحالة غني بالإنزيمات ومنها إنزيم الدياستيز الأكثر نشاطاً ) .
3-انقل 5 مل من مستخلص الإنزيم المحضر إلى كل من أنبوبتي اختبار وسخن المحلول في أحدى الأنبوبتين ( أ ) إلى درجة الغليان ثم برده .
واترك المحلول في الأنبوبة الأخرى ( ب ) دون تسخين .
4-خذ كمية قليلة من محتويات كل أنبوبة وأضف إليها حجماً مماثلاً من محلول النشا 1 % مع الرج حتى تمتزج المحاليل جيداً ثم ضع الأنبوبتين في حمام مائي عند 30 ْم .
5-خذ كمية بسيطة ( قطرات ) من المحلول في كل أنبوبة باستخدام قطارة نظيقة ( كل دقيقتين ) وضعها في فجوة من فجوات الطبق ذو الفجوات المتعددة ( يمكن استخدام طبق الرسم ) وأضف للقطرات قطرة أو اثنتين من محلول اليود .
6-كرر العملية السابقة كل دقيقتين و لاحظ التغير في اللون في كلا الأنبوبتين ( أ ) و ( ب ) مع مرور الزمن نتيجة إضافة اليود لهما .
7-بعد مرور نصف ساعة من بدء التجربة خذ 3 مل من كل أنبوبة مع 3 مل من محلول فهلنج أ و ب للكشف عن السكريات المختزلة ( سكر الجلوكوز ) .
-بالنسبة للأنبوبة ( أ ) التي قمنا بغليها ثم أضفنا النشا إليها نلاحظ أن لون المحلول يبقى دون تغير ( يبقى أزرق قاتم ) عند إضافة اليود إليه وذلك بسبب تكسر الإنزيم بفعل التسخين .
أما بالنسبة للأنبوبة ( ب ) والذي لم يتعرض المحلول فيه إلى معاملة حرارية فيتغير لون المحلول المضاف إليه اليود بمرور الوقت من اللون الأزرق القاتم إلى لون أفتح بالتدريج مع مرور الوقت حتى يختفي اللون وذلك دلالة على حدوث الهضم للنشا بفعل إنزيم الدياستيز ( الأمليز ) وتحوله إلى سكر أحادي هو الجلوكوز .
وللتأكد من وجود سكر الجلوكوز نقوم بالكشف عنه بإضافة 3 مل من الأنبوبة ( ب ) إلى 3 مل من محلول فهلنج أ و ب وبالتسخين يتحول لون المحلول إلى اللون الأحمر الطوبي دلالة على وجود سكر الجلوكوز في الأنبوبة ب . أما بالنسبة للأنبوبة ( أ ) فلا يتغي اللون إلى الأحمر الطوبي مع التسخين لعدم وجود سكر الجلوكوز .