طرق و تقنيات فحص الدم , Haematologic examination technics

ويتم فحص الدم بعدة طرق وباتباع عدة تقنيات مخبرية من أهمها :
1- فحص فيلم الدم الرقيق Examination of thin blood film :
– خذ نقطة دم بواخزة معقمة من الإصبع وضعها على طرف شريحة نظيفة .
– خذ شريحة ثانية وضعها على النقطة بزاوية 45 ْ ثم اسحب النقطة في الإتجاه الآخر للشريحة فيتكون لدينا فيلم للدم رقيق في نهاية الشريحة مكوناً ما يشبه الذيل .
– جفف الفيلم في الهواء ثم قم بعملية الصبغ ( يمكن الصبغ بأحد الطرق التالية ) .
صبغة ليشمان :
– أضف صبغة ليشمان على الفيلم لمدة 30 ثانية .
– أضف كمية مضاعفة من الماء المقطر لكمية الصبغة على الشريحة واتركها لمدة 15 دقيقة.
– اغسل الشريحة جيداً بماء الصنبور ثم اتركها لتجف .
– تفحص الشريحة باستخدام المجهر تحت العدسة الزيتية .
صبغة جيمسا :
– بعد تحضير فيلم الدم كما سبق نقوم بعملية الصبغ .
– قبل جفاف فيلم الدم بإضافة الميثانول أو الإيثانول لمدة 3 – 5 دقائق ثم تترك الشريحة لتجف .
– تخفف الصبغة ( نقطة من الصبغة مع 1 ملل ماء مقطر ) ثم تضاف للشريحة وينتظر لمدة 30 – 45 دقيقة .
– اغسل الشريحة بماء الصنبور ثم اتركها لتجف .
– تفحص الشريحة تحت العدسة الزيتية .

2- فحص فيلم الدم السميك Examination of thick blood film :
– يحضر بوضع قطرة دم كبيرة ثم تفرد على الشريحة .
– وتصبغ كما سبق بطريقة جيمسا أو ليشمان أو Field`s stain . مع ملاحظة إزالة الهيموجلوبين من العينة إذا استخدمت الطريقتين السابقتين في عملية الصبغ .
يزال الهيموجلوبين كما يلي :
– استخدام خليط من حمض الخل وحمض الترتريك ( 40 ملل من 2% حمض الخل مع 10 ملل من 2% حمض الترتريك ) تغمر الشريحة حتى يتحول لون الفيلم إلى اللون الأبيض ثم يزال المحلول عنها بتمييلها ( لا تغسل بالماء ) ثم يثبت الفيلم بالميثانول لمدة 3 – 5 دقائق ثم تغسل الشريحة جيداً بالماء حتى يزول أثر الحمض .
– تغمر الشريحة بالماء المقطر لمدة 5 – 10 دقائق ثم تجفف الشريحة وتصبغ بصبغة جيمسا أو صبغة ليشمان كما سبق ذكره .

Field`s stain :
تستخدم في صبغ فيلم الدم السميك بسرعة وذلك للكشف عن الملاريا وهي تحتوي على محلولين ( أ ) و ( ب ) وتوضع الصبغة في إناء الصبغ الزجاجي للسماح بغمر الشريحة بشكل جيد . وتتم هذه الطريقة كما يلي :
1- يوضع فيلم الدم السميك في محلول ( أ ) لمدة 1 – 2 ثانية أو حتى التأكد من زوال لون الهيموجلوبين .
2- تغسل الشريحة بعد ذلك بالماء الجاري حتى زوال الصبغة تماماً .
3- توضع الشريحة في محلول ( ب ) لثانية واحدة ثم تغسل الشريحة بوضعها في ماء نظيف لمدة 3 ثواني ثم تجفف وتفحص .

فحص الدم للمايكروفيلاريا :
نحضر فيلم سميك من الدم وبعد ذلك يترك ليوم ثم يزال الهيموجلوبين بوضع الشريحة في الماء فقط ثم يثبت الفيلم بوضعه في الميثانول ثم يصبغ بصبغة جيمسا أو ليشمان .

الفحوصات التي تجرى للتأكد من وجود الدم في البراز :
قد يوجد الدم في البراز بنوعين هما : الدم المرئي وهذا يسهل تشخيصه بالعين المجردة حيث يظهر اللون الأحمر في عينة البراز . وقد يوجد الدم بصورة غير مرئية وهو ما يعرف بـ Occult blood وهذا يحتاج لطريقة كيميائية لتشخيصه ومن هذه الطرق :

أ – Orthotolidin test : ويتم إجراءه كما يلي :
1- خذ كمية قليلة من البراز وأضف عليها 5 ملل من الماء المقطر ثم اغلها لمدة 5 دقائق .
2- حضر 4 % من محلول Orthtolidin Stock ( أذب 4 جم من Orthtolidin في 100 ملل من 95 % إيثانول ) ويستعمل بتحضير حجم واحد منه مع 5 أحجام من Glacial acetic acid .
3 – خذ ا ملل من المحلول المحضر وأضف ربع ملل من محلول فوق أكسيد الهيدروجين .
4- اخلط المكونات المذكورة مع عينة البراز المحضرة ثانتظر لمدة 3 دقائق ثم خذ النتيجة . فإذا ظهر لون أخضر داكن دل ذلك على نتيجة إيجابية .

ب – Haematest tablet test :
تحتوي هذه الأقراص على Strontium peroxide + Orthotolidin ويتكون لون أزرق عند تماس القرص الرطب مع البراز الذي يحتوي على الدم .
ولإجراء هذا الفحص يحضر فيلم رقيق من البراز على الورقة الخاصة بالفحص وتضاف نقطتين من الماء على القرص وفي حال تكون لون أزرق واضح خلال دقيقتين كانت النتيجة موجية أما إذا كان اللون الزرق خفيفاً دل ذلك على نتيجة سلبية .

Benzidine test :
يحضر فيلم رقيق من البراز على ورقة ترشيح ثم أضف 3 نقاط من محلول البنزيدين المشبع ( المذاب في Glacial acetic acid ) ثم يضاف نقطتين من محلول فوق أكسيد الهيدروجين تركيز 30 % . فإذا ظهر لون أزرق أو أخضر خلال دقيقة دل ذلك على نتيجة إيجابية .