صبغ الاسواط في البكتيريا , Flagella staining

تمهيـد :
ترجع الحركة في معظم أنواع البكتيريا المتحركة إلى امتلاك خلاياها أسواطاً في أحد أطرافها أو كليهما أو موزعة على جانبيها . وحركة البكتيريا و عدد وتوزيع الأسواط على خلاياها تعتبر من الصفات الهامة المميزة للأنواع البكتيرية تستغل في أغراض التصنيف .
والمشكلة الحقيقية في صبغ الأسواط هو ضآلة سمكها الذي لا يقع ضمن القوة التمييزية للميكروسكوبات , وعلى ذلك فإن من أهم الخطوات التي تسبق عملية الصبغ إضافة بعض المواد التي تترسب على السوط لتزيد من سمكه ليسهل مشاهدته بالميكروسكوب الضوئي العادي . ويعد حمض التانيك Tanic acid من أهم المواد المستعملة لذلك بالإضافة إلى أنه يعطي قابلية أفضل للخلايا لتقبل الأصباغ المستعملة .
وهناك عدة طرق مستخدمة لصبغ الأسواط ولكن من المهم استعمال شرائح غاية في النظافة.

المواد والأدوات اللازمة :
مزرعة من بكتيريا Erwina carotovora وأخرى من Agrobacterium tumefaciens لايزيد عمر المزرعة عن ( 12-24) ساعة – ماء مقطر – صبغة الأسواط أ , ب – شرائح نظيفة .
خطوات العمل :
1- جهز مزرعة من بكتيريا Erwina carotovora وأخرى من Agrobacterium tumefaciens لايزيد عمر المزرعة عن 12-24 ساعة على آجار مائل .
2- اغمر سطح المزرعة بالماء المقطر مع التحريك الخفيف .
3- انقل معلق الخلايا الخفيف جداً والمتكون في الأنبوبة إلى أنبوبة نظيفة ثم اترك الأنبوبة حوالي ساعة , في خلال ذلك قم بتحضير الصبغتين أ , ب ( راجع الملحق ) .
4- انقل نقطة من معلق الخلايا إلى شريحة نظيفة مع ملاحظة أخذ النقطة من السطح حيث أن الخلايا المتحركة تكون بالقرب من السطح .
ضع الشريحة مائلة قليلاً لتنحدر نقطة معلق الخلايا على الشريحة مكونة غشاء ثم تترك الشريحة ليجف الغشاء في الهواء .
5- اغمر الشريحة بمحلول الصبغة ( أ ) لمدة 6 – 8 دقائق .
6- تخلص من الصبغة بصبها في الحوض المعد لذلك ثم اغسل الشريحة بالماء المقطر جيداً لمنع تكون ترسبات تعيق الرؤية .
7- اغمر الشريحة بمحلول ( ب ) لمدة 30 ثانية ثم اغسل بالماء المقطر .
8- اترك الشرائح لكي تجف .
9- افحص الشرائح بالعدسة الزيتية مع وصف شكل الخلايا وارسمها موضحاً عدد الأسواط ومواضعها بالنسبة للخلية البكتيرية .